一、原理:
體外培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來(lái)表示。它與生長(zhǎng)曲線有一定的聯(lián)系,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長(zhǎng)期。分裂指數(shù)指細(xì)胞群體中分裂細(xì)胞所占的百分比,它是測(cè)定細(xì)胞周期的一個(gè)重要指標(biāo),也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。
二、儀器、用品與試劑
1、儀器與用品:CO2培養(yǎng)箱、普通顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)血、蓋玻片、吸管
2、試劑:培養(yǎng)液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
三、操作步驟
1、消化細(xì)胞,將細(xì)胞懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。
2、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),使細(xì)胞長(zhǎng)在蓋片上。
3、取出蓋片,按下列順序操作:
PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來(lái)水沖洗。
4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。
5、計(jì)算:
分裂指數(shù)=分裂細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%
四、注意事項(xiàng);
操作時(shí)動(dòng)作要輕,以免使蓋片上的細(xì)胞脫落。