| 產(chǎn)品名稱 |
人膽囊上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞 |
| 商品貨號 |
MZ-3689 |
| 中文名稱 |
人膽囊上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞 |
| 細(xì)胞數(shù)量 |
1*10^6 |
| 組織來源 |
人膽囊組織。 |
| 細(xì)胞形態(tài) |
上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。 |
| 細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)基 |
原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 |
| 細(xì)胞描述 |
膽囊，是位于右方肋骨下肝臟后方的梨形囊袋構(gòu)造，有濃縮和儲存膽汁之作用。膽囊壁由粘膜、肌層和外膜三層組成。 膽囊內(nèi)面以粘膜覆蓋，有發(fā)達(dá)的皺襞。膽囊收縮排空時，皺襞高大而分支；膽囊充盈時，皺襞減少變矮。粘膜上皮為單層柱狀，內(nèi)分散分部著少量杯狀細(xì)胞。膽囊粘膜細(xì)胞具有典型的吸收型細(xì)胞的特征，具有較強(qiáng)的吸收和濃縮功能，上皮細(xì)胞吸收膽汁中的水和無機(jī)鹽，經(jīng)細(xì)胞側(cè)面的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)至上皮細(xì)胞間隙內(nèi)，吸收的水和無機(jī)鹽通過基膜進(jìn)入固有層的血管和淋巴管內(nèi)。同時，膽囊粘膜亦有分泌功能，分泌粘液。 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。 |
| 培養(yǎng)條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
| 細(xì)胞凍存 |
Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
| 細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 細(xì)胞復(fù)蘇步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
| 細(xì)胞凍存步驟 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 細(xì)胞運(yùn)輸 |
干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25細(xì)胞瓶） |
